产品货号:
TD1267
中文名称:
MTT溶液(5mg/ml)
英文名称:
产品规格:
1ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
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MTT比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。在特定溶剂(如DMSO)存在的情况下,可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。
使用方法(仅供参考):
1.细胞用含血清的培养液培养至对数生长期,常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。
2.低速离心,收集细胞沉淀。
3.用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。
4.细胞接种于96孔培养板,一般接种密度为3000-10000/孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞,细胞毒性实验每孔加6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。
5.37℃ 5% CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养6-24h。
6.按照实验具体要求,给予0~20μL干预药物处理,37℃ 5% CO2继续培养至合适时间。
7.弃培养液,每孔加入MTT溶液和新鲜培养液,在细胞培养箱内继续孵育。
8.弃培养液,每孔加入DMSO,置摇床上低速震荡,使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多,溶解的时间会长一些。
9.在酶标仪570nm测定各孔吸光度。若读数超出最大范围,可改用OD490测定各孔吸光值。
注意事项:
1、MTT溶液尽量减少反复冻融的次数,以免失效,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。
2、由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。
3、MTT溶液在低温情况下会凝固,使用前请置于室温或20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、观察Formazan是否完全溶解,亦可借助光学显微镜观察。
5、培养细胞时尽量避免细菌污染。
6、应注意设立OD调零孔和对照。
7、含酚红的培养基和盐溶液会使背景的吸光值增高,同时也会降低灵敏度。
8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关搜索:MTT溶液(5mg/ml)
使用方法(仅供参考):
1.细胞用含血清的培养液培养至对数生长期,常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需消化)。
2.低速离心,收集细胞沉淀。
3.用培养液重悬细胞沉淀,制备成单细胞悬液,并计数。
4.细胞接种于96孔培养板,一般接种密度为3000-10000/孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞,细胞毒性实验每孔加6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定。
5.37℃ 5% CO2继续培养或按照实验具体需要进行培养,一般培养6-24h。
6.按照实验具体要求,给予0~20μL干预药物处理,37℃ 5% CO2继续培养至合适时间。
7.弃培养液,每孔加入MTT溶液和新鲜培养液,在细胞培养箱内继续孵育。
8.弃培养液,每孔加入DMSO,置摇床上低速震荡,使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多,溶解的时间会长一些。
9.在酶标仪570nm测定各孔吸光度。若读数超出最大范围,可改用OD490测定各孔吸光值。
注意事项:
1、MTT溶液尽量减少反复冻融的次数,以免失效,当颜色变为灰绿色时,请勿使用。
2、由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,应注意蒸发问题。
3、MTT溶液在低温情况下会凝固,使用前请置于室温或20~25℃水浴至全部融解后使用。
4、观察Formazan是否完全溶解,亦可借助光学显微镜观察。
5、培养细胞时尽量避免细菌污染。
6、应注意设立OD调零孔和对照。
7、含酚红的培养基和盐溶液会使背景的吸光值增高,同时也会降低灵敏度。
8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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